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15版藥典增補(bǔ)版-疫苗佐劑氫氧化鋁對(duì)牛血清白蛋白的吸附率解決方案

發(fā)布時(shí)間:2018-12-07

瀏覽次數(shù):4465

紫外可見(jiàn)分光光度法測(cè)定疫苗佐劑氫氧化鋁對(duì)牛血清白蛋白的吸附率

 

1.指導(dǎo)通則信息

1.1 依據(jù)指導(dǎo)通則號(hào):3701氫氧化鋁佐劑(2015版中國(guó)藥典增補(bǔ)版三部生物制品新增指導(dǎo)通則部分【3.6 吸附率】)

1.2 指導(dǎo)通則名稱:3701氫氧化鋁佐劑

1.3 指導(dǎo)通則適用范圍:疫苗佐劑氫氧化鋁(包括原位吸附疫苗的鋁稀釋制劑)的質(zhì)量控制

1.4 指導(dǎo)通則發(fā)布時(shí)間:2018719

1.5 指導(dǎo)通則實(shí)施時(shí)間:201911

1.6 發(fā)布單位:國(guó)家藥典委員會(huì)

2.吸附率項(xiàng)目標(biāo)準(zhǔn)正文

3.6 吸附率

        以氫氧化鋁對(duì)牛血清白蛋白的吸附作用計(jì)算吸附率。

       2.1  供試品溶液制備:取供試品適量,用生理氯化鈉溶液稀釋至鋁含量為1mg/mL,調(diào)節(jié)pH值至6.0~7.0,即為供試品溶液。同一種鋁佐劑不同批次的pH值應(yīng)調(diào)節(jié)為固定值,以保證不同批次檢測(cè)的批間一致性。

        2.2 牛血清白蛋白(簡(jiǎn)稱牛白)溶液:取牛血清白蛋白適量,用生理氯化鈉溶液配置成10mg/ mL溶液,調(diào)節(jié)pH與供試品溶液pH一致。

       2.3  測(cè)定法:取15mL離心管5支,分別加牛血清白蛋白溶液(10mg/ mL)0.08 mL、0.16 mL、0.4 mL、0.8 mL、1.2 mL,并補(bǔ)生理氯化鈉溶液至4.0 mL,混勻后,每管分別加入供試品溶液1.0 mL,混勻,使各管牛血清白蛋白分別為0.8 mg、1.6 mg、4 mg、8 mg、12 mg,各管鋁為1 mg。

       2.4  將上述各管室溫放置1小時(shí)(期間每隔10分鐘用力振搖1次)后,5000g離心10分鐘收集上清液,采用Lowry法(通則0731)或其它適宜方法測(cè)定各管上清液中游離牛血清白蛋白含量,記錄各管OD值并計(jì)算蛋白含量,以各管上清液游離的牛血清白蛋白含對(duì)應(yīng)其牛血清白蛋白總量計(jì)算各管吸附率(A)。上清液體積按5 mL計(jì)算。

         吸附率(A)%=100×(牛血清白蛋白總量-上清液游離蛋白含量)/牛血清白蛋白總量

       2.5  結(jié)果判定:牛白含量為0.8 mg、1.6 mg的2管上清蛋白應(yīng)為未檢出,即吸附率應(yīng)不低于90%;且牛白含量為4 mg、8 mg、12 mg各管OD值應(yīng)成總體遞增趨勢(shì)(如OD值無(wú)法判定,需通過(guò)檢測(cè)上清蛋白含量判定總體遞增趨勢(shì)),吸附率判為合格。

        2.6 如供試品鋁含量低于1 mg/ mL,可按適當(dāng)比例調(diào)整上述各管鋁含量和牛白含量后進(jìn)行。結(jié)果判定以每1mg  鋁吸附1.6 mg牛白的吸附率應(yīng)不低于90%(即上清蛋白未檢出),且每1 mg鋁與更高濃度牛白吸附時(shí),隨牛白含量的遞增各管OD值應(yīng)呈總體遞增趨勢(shì)(如OD值無(wú)法判定,需通過(guò)檢測(cè)上清蛋白含量判定總體遞增趨勢(shì)),吸附率判為合格。

3.分析方法簡(jiǎn)述

        根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)正文內(nèi)容,上清液游離蛋白含量采用Lowry法或其它適宜方法,2015版藥典四部0731蛋白質(zhì)含量測(cè)定法中提到福林酚法(Lowry)或其它方法共6種,均采用紫外分光光度計(jì)來(lái)進(jìn)行分析檢測(cè)。方法相關(guān)信息如下表所示:

方法名稱

試劑

檢測(cè)波長(zhǎng)

計(jì)算方法

福林酚法(Lowry1

堿性銅試液(氫氧化鈉、碳酸鈉、酒石酸鉀、硫酸銅、)

650nm

標(biāo)準(zhǔn)曲線法

福林酚法(Lowry2

試劑A(氫氧化鈉、碳酸鈉);試劑B(二水合酒石酸二、硫酸銅);福林酚試液

750nm

標(biāo)準(zhǔn)曲線法

雙縮脲法

雙縮脲試液(硫酸銅、酒石酸鉀鈉、碘化鉀、氯化鈉)

540nm

標(biāo)準(zhǔn)曲線法

2,2'-聯(lián)喹啉-4, 二羧酸法(BCA法)

-BCA試液(22'-聯(lián)喹啉-4,八二羧酸鈉、無(wú)水碳酸鈉、酒石酸鈉、氫氧化鈉、碳酸鈉、硫酸銅)

562nm

標(biāo)準(zhǔn)曲線法

考馬斯亮藍(lán)法(Bradford法)

考馬斯亮藍(lán)G250

595nm

標(biāo)準(zhǔn)曲線法

紫外-可見(jiàn)分光光度法

——

280nm/260nm

對(duì)照品比較法或吸收系數(shù)法

4.儀器配置方案

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)解析內(nèi)容,推薦以下適用的產(chǎn)品:

  • 企業(yè)名稱:

    北京普析通用儀器有限責(zé)任公司

  • 聯(lián)系電話:

    18001075583

  • 公司地址:

    北京市平谷區(qū)平三路3號(hào)

  • 企業(yè)郵箱:

    tao.xu.rl@pgeneral.com.cn

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